免疫共沉淀co-IP

实验原理

细胞在非变性条件下被裂解时，细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。再通过蛋白变性分离，对B蛋白进行检测，进而证明两者间的相互作用。

技术应用

1.在体内验证两个蛋白质相互作用

2.在体内筛选和目的蛋白互作的未知蛋白

基本流程

技术优势

（1）相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；

（2）蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；

（3）可分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。

结果展示

图示为验证蛋白A与蛋白B是是否存在相互作用的结果图。由图可以发现，该实验被分为两组：Input组及IP组。由Input组得到结论：蛋白A与蛋白B都是存在的。IP组中IgG是阴性对照，用于排除蛋白与抗体非特异性结合，蛋白A与蛋白B没有被沉淀下来；IP组protein A表示用蛋白A的抗体进行沉淀实验，结果蛋白A被沉淀下来，蛋白B也被沉淀下来，结论：蛋白A与蛋白B之间存在相互作用。

样品要求

1、需检测的样品，一抗。

2、送样要求：

▶ 离体后迅速超低温处理并-80℃冻存的组织样品，干冰运输；

▶ 组织：动物组织不少于400 mg；植物组织不少于2 g；

▶ 细胞：2x10^7个细胞。