miRNA
借助荧光染料或荧光标记的特异性探针,在PCR扩增期间(变性-退火-延伸)实时监测PCR反应体系中的荧光信号强度的变化,荧光信号的强度与PCR扩增产物的含量成正比,从而实现对目的基因表达水平的检测。
技术应用
应用于基因表达丰度、拷贝数等研究及临床疾病检测(新冠)等许多领域。
基本流程
结果展示
样本要求
样品及尽可能详细的背景信息(如物种信息,扩增目的基因NCBI登录号,相关文献和样品来源等)。
样品:组织应不少于100 mg;
细胞10^6-10^7个细胞;
细胞或组织裂解液总RNA浓度须大于1 mg/mL,单个样品不少于50 μL;cDNA不少于30 μg。
(组织需液氮速冻、细胞收获后加入Trizol保存于-80度。样品用干冰寄送。避免各类污染和反复冻融。)
技术优势
①高灵敏度和高特异性:通过荧光信号的实时监测,可以精确定量目标DNA序列的丰度,具有高灵敏度和高特异性。
②快速和高通量:qRT-PCR反应时间相对较短,可以在较短时间内完成大量样品的分析,适用于高通量实验。
③定量范围广:qRT-PCR可以在非常低的目标DNA浓度范围和非常高的目标DNA浓度范围内进行定量,具有广泛的定量范围。
④可靠性和准确性:通过内部标准和质量控制,可以减少样品间和批次间的变异性,提高结果的可靠性和准确性。
⑤多功能性:qRT-PCR可以应用于基因表达分析、病原体检测、突变分析、miRNA研究等多个研究领域,具有广泛的应用潜力。